ATPASA MITOCONDRIAL, ÓXIDO NÍTRICO Y GLICOPROTEÍNA-P COMO BIOMARCADORES ANTE LA EXPOSICIÓN AL PARAQUAT EN Colossoma macropomum (Cuvier,1818)

Abstract

Con el propósito de evaluar el efecto de la concentración subletal del herbicida Paraquat (PQ) sobre la actividad ATPasa mitocondrial (AATPM), la concentración de óxido nítrico (ON), glutatión reducido (GSH) y la expresión de la glicoproteína-P (gp-P) en el tejido hepático y muscular del pez C. macropomum; se procedió a determinar el LC50 a 96 h de PQ en la especie, usando el método binomial y el método logit, a partir de este valor, se estableció la concentración subletal de 10 mg.L-1 PQ a la cual fueron expuestos 54 peces juveniles, con sus respectivos controles, a una temperatura promedio de 29°C ± 0,86 °C durante 7, 14, y 21 días. Finalizado el bioensayo se extrajo el tejido hepático y muscular de los peces estudiados. Se procedió a obtener las partículas submitocondriales (PSM) del tejido; mediante ciclos de sonicación y centrifugación para determinar, en estas, la AATPM hepática y muscular mediante la cuantificación del fósforo inorgánico liberado por la acción enzimática de la ATPasa mitocondrial. Se determinó la concentración de óxido nítrico (ON) presente en el tejido muscular por el método de Griess, la concentración de glutatión reducido (GSH) hepático y muscular mediante la técnica Beutler et al. (1963). Se obtuvo, la fracción de membrana que contiene a la gp-P, del tejido hepático, mediante ciclos de ultracentrifugaciones y fue resuelta por SDS-PAGE. El valor del LC50 a 96 horas obtenido fue de 40mg.L-1 y 48,05 mg.L-1. La AATPM muscular de los peces expuestos a 10 mg.L-1 PQ disminuyó a los siete días de exposición, recuperándose durante el tiempo de exposición. Sin embargo, la AATPM hepática, en los peces expuestos, disminuyó a partir del día catorce. La concentración de ON muscular, en los peces expuestos disminuyó. Los valores de la concentración de GSH hepático disminuyeron en los peces expuestos durante catorce días. La exposición al PQ induce la expresión de una proteína de masa molecular aparente de 170 kDa correspondiéndose con la masa molecular de la gp-P. Estos resultados indican que la exposición de C. macropomum a 10 mgL-1 PQ inhibe la AATPM, debido a la posible interacción del tóxico con la cadena transportadora de electrones aumentando la producción de radicales superoxidos y la peroxidación lipídica, hecho que posiblemente este afectando el potencial de la membrana mitocondrial y la fosforilación oxidativa, siendo más evidente en el tejido hepático. Además, el herbicida inhibe la producción de ON muscular demostrando que el mayor efecto tóxico del PQ es producto del estrés oxidativo y no del nitrosativo. La disminución de la concentración del GSH en el tejido hepático sugiere la incapacidad de los peces expuestos para regenerarlo debido al agotamiento de su sistema redox. Por último induce la expresión de la gp-P, un mecanismo detoxificador, que le permite presentar ciertos niveles de resistencia ante el efecto tóxico del herbicida. Por lo que se concluye que el PQ parece inducir en C. macropumum cambios bioquímicos que alteran su sistema redox; sin embargo, la especie logra resistir estos efectos debido a la expresión de mecanismos detoxificadores, como la gp-P y probablemente a la disminución en la producción de energía, pudiendo ser la especie un potencial bioindicador de la contaminación acuática por el herbicida.