Evaluación del efecto in vitro de 20- PIPERIDIN-2-IL-5α-PREGNANO-20(R)-3β-DIOL (AZA1) y 22-PIPERIDIN-3-IL-PREGNANO-22(S)-3β-DIOL (AZA3) sobre aislado de Trypanosoma cruzi de zona endémica del Estado Portuguesa

Abstract

La enfermedad de Chagas o tripanosomiasis americana, es una zoonosis producida por el protozoario flagelado Trypanosoma cruzi que constituye un grave problema de salud pública en América Latina. Las drogas comúnmente utilizadas para su tratamiento, Benznidazol y Nifurtimox, son efectivas sólo en la fase aguda e inducen serios efectos colaterales, que pueden conllevar a la interrupción del tratamiento. En este sentido, se evaluó el efecto in vitro de 20-piperidin-2-il-5α-pregnano-20(R)- 3β- diol (AZA1) y 22-piperidin-3-il-pregnano-22(S)-3β-diol (AZA3) como posibles inhibidores de la ∆24(25)-esterol metiltransferasa (24-EMT), sobre epimastigotes de T. cruzi (aislado B28V506) de una región endémica del estado Portuguesa; mantenidos en fase exponencial en medio LIT suplementado con suero fetal bovino 10% a 26o C, con agitación. Para ello, se determinó la densidad celular por contaje directo en cámara de Neubauer e indirectamente por espectrofotometría a 560 nm. La viabilidad, se cuantificó por el método de exclusión con azul de tripano. La purificación de esteroles libres, se hizo mediante cromatografía en columna con acido silícico, mientras que la caracterización y cuantificación por cromatografía de gases y espectrometría de masas. La ultraestructura, se realizó por métodos convencionales para microscopía electrónica de transmisión. Asimismo, la citotoxicidad de los azasteroles sobre células Vero, se determinó mediante cuantificación de viabilidad por exclusión de azul de tripano. Se encontró a las 120 h un efecto antiproliferativo dosis-dependiente sobre epimastigotes de T. cruzi y se estimaron para BZN (CMI: 29,2 μM y CI50: 15,7 μM); AZA1 (CMI: 18,2 μM y CI50: 10,6 μM) y para AZA3 (CMI: 2,3μM y CI50:1,45μM). Los azasteroles indujeron gran acumulación de zimosterol, no detectado en parásitos no tratados con disminución drástica de los esteroles esenciales tipo ergosta, acompañado de alteraciones ultraestructurales considerables apenas con una CI16, como evaginaciones en la membrana plasmática, vacuolización y pérdida de la integridad mitocondrial. Con las CMI de AZA1 y AZA3 en células Vero, se encontró un bajo efecto citotoxico en relación a células no tratadas. Estos hallazgos sugieren que la potente actividad tripanocida (12.7 veces AZA3 y 1.6 veces AZA1, mayores que la droga de tratamiento convencional BZN) podría estar asociada con la inhibición de la actividad de la enzima 24-EMT, específica de estos eucariotes inferiores, lo cual es soportado por su baja toxicidad en células Vero, constituyendo así una herramienta prometedora en la búsqueda de nuevas drogas que permitan resolver el grave problema de salud pública que representa la enfermedad de Chagas en América Latina.